说明:
所有使用大号研磨珠时,都需要用2ml的U底管,1.5ml尖底管会卡住;
组织块大小最好在1-3mm以下
珠子使用前,最好用无水乙醇浸泡15分钟以上,倒掉无水乙醇,烘干备用
保证低温的几个方法:a, 可以的情况下,研磨时间尽可能短;b, 采用铝合金管适配器(在-80°冰箱预冷或者液氮速冻);c, 研磨珠和研磨管不用时就放在低温冰箱(-20或者4°)
DNA提取
组织 | 研磨珠规格与数量 | 频率 | 时间 | 建议溶液 |
植物组织 | 2-3粒小号,或者1粒大号 | 60Hz | 40-90秒 | TPS液,不容易起泡 |
心、肾、肌肉 | 1粒大号 | 65Hz | 60秒 | |
胃、肠、肺 | 1粒大号加2粒小号 | 65 Hz | 90-120秒 | |
肝、脑、脾 | 1-2粒小号 | 60 Hz | 45-60秒 | |
血管 | 1-2粒小号(如果加入适当石英砂,效果更佳) | 60 Hz | 60秒 |
RNA提取
组织 | 研磨珠规格与数量 | 频率 | 时间 | 建议溶液 |
植物组织 | 2-3粒小号,或者1粒大号 | 60Hz | 40-90秒 | Trizol |
心、肾、肌肉 | 1粒大号 | 65Hz | 60秒 | Trizol |
胃、肠、肺 | 1粒大号加2粒小号 | 65 Hz | 90-120秒 | Trizol |
肝、脑、脾 | 1-2粒小号 | 60 Hz | 30-60秒 | Trizol |
血管 | 1-2粒小号(如果加入适当石英砂,效果更佳) | 60 Hz | 60秒 | Trizol |
大号6mm;中号4mm;小号 3mm |
为了尽可能的让研磨的样品温度低,有几方面需要注意:
适配器不用时放在-20°冰箱里头;研磨管和研磨珠可以放在-80°或-20°冰箱
在能保证研磨效果的情况下,尽可能的放的珠子数量要少,研磨时间尽可能的短
蛋白质提取
蛋白质提取时,最好频率设定在60Hz,研磨时间较RNA提取研磨时间延长30秒左右,具体的研磨时间需要看研磨的组织量和类型而定,容易研磨的如:肝、脑、脾,用2粒4mm珠子,研磨45秒;难研磨的如:心、肾、肌肉,使用2ml离心管,放入4mm以上的大珠子1粒,加3mm的小珠子1-2粒,研磨60秒。研磨时,加入提取液。
液氮研磨
需要特别低温的(做酶活实验),或者难研磨样品(皮肤,骨头,毛发)等,可以使用2ml的管子,加入1粒6mm珠子,加入样品后(样品,剪成1-2mm左右的小块),将管子盖严,放入铝合金适配器,放入液氮中冷冻2分钟左右,在55-hz研磨15-30秒即可,研磨效果跟用研磨液氮研磨几乎相同。如果研磨效果不是特别理想,可以再冷冻一次,重复研磨。请勿研磨时间过长,样品温度升高,容易夯实。