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2021-08-11 10:12:53
wonbio研磨仪样品前处理方式方法
来源:万柏生物

说明:

所有使用大号研磨珠时,都需要用2ml的U底管,1.5ml尖底管会卡住;

组织块大小最好在1-3mm以下

珠子使用前,最好用无水乙醇浸泡15分钟以上,倒掉无水乙醇,烘干备用

保证低温的几个方法:a, 可以的情况下,研磨时间尽可能短;b, 采用铝合金管适配器(在-80°冰箱预冷或者液氮速冻);c, 研磨珠和研磨管不用时就放在低温冰箱(-20或者4°)

DNA提取

组织研磨珠规格与数量频率时间建议溶液
植物组织2-3粒小号,或者1粒大号60Hz40-90秒TPS液,不容易起泡
心、肾、肌肉1粒大号65Hz60秒
胃、肠、肺1粒大号加2粒小号65 Hz90-120秒
肝、脑、脾1-2粒小号60 Hz45-60秒
血管1-2粒小号(如果加入适当石英砂,效果更佳)60 Hz60秒

 

RNA提取

组织研磨珠规格与数量频率时间建议溶液
植物组织2-3粒小号,或者1粒大号60Hz40-90秒Trizol
心、肾、肌肉1粒大号65Hz60秒Trizol
胃、肠、肺1粒大号加2粒小号65 Hz90-120秒Trizol
肝、脑、脾1-2粒小号60 Hz30-60秒Trizol
血管1-2粒小号(如果加入适当石英砂,效果更佳)60 Hz60秒Trizol
大号6mm;中号4mm;小号 3mm

 

为了尽可能的让研磨的样品温度低,有几方面需要注意:

适配器不用时放在-20°冰箱里头;研磨管和研磨珠可以放在-80°或-20°冰箱

在能保证研磨效果的情况下,尽可能的放的珠子数量要少,研磨时间尽可能的短

蛋白质提取

蛋白质提取时,最好频率设定在60Hz,研磨时间较RNA提取研磨时间延长30秒左右,具体的研磨时间需要看研磨的组织量和类型而定,容易研磨的如:肝、脑、脾,用2粒4mm珠子,研磨45秒;难研磨的如:心、肾、肌肉,使用2ml离心管,放入4mm以上的大珠子1粒,加3mm的小珠子1-2粒,研磨60秒。研磨时,加入提取液。

液氮研磨

需要特别低温的(做酶活实验),或者难研磨样品(皮肤,骨头,毛发)等,可以使用2ml的管子,加入1粒6mm珠子,加入样品后(样品,剪成1-2mm左右的小块),将管子盖严,放入铝合金适配器,放入液氮中冷冻2分钟左右,在55-hz研磨15-30秒即可,研磨效果跟用研磨液氮研磨几乎相同。如果研磨效果不是特别理想,可以再冷冻一次,重复研磨。请勿研磨时间过长,样品温度升高,容易夯实。